Reactivo R3001 2000U de la polimerización en cadena de Transcriptase del revés del oro

Revés Transcriptase R3001 (2,000U) del oro

Revés Transcriptase del oro

Para el uso de la investigación solamente

Componentes

Almacenamiento

Este reactivo se debe guardar en -30~15°C.

Descripción

El revés Transcriptase del oro es un nuevo transcriptase reverso obtenido por la evolución molecular in vitro basada en el revés Transcriptase de M-MLV (ARNasa h). El primer filamento del cDNA se puede sintetizar en el revés Transcriptase del oro 37~55°C. tiene fomentar sensibilidad perceptiblemente mejorada, especificidad, estabilidad termal y la semivida, que es muy conveniente para la transcripción reversa de las plantillas del ARN con la estructura secundaria compleja. El revés Transcriptase del oro tiene capacidad más fuerte de la polimerización y de la extensión, que se puede utilizar para la síntesis del cDNA largo y la construcción de la parte elevada de la biblioteca integral del cDNA.

Definición de la unidad

Polivinílico (rA)·Oligo (despegue) fue utilizado como la plantilla/la cartilla. En 37°C para el minuto 10, la cantidad de enzima requerida para añadir 1 dTTP del nmol como sustancia insoluble en el ácido fue definida como 1 unidad de la actividad (u).

Control de calidad

Detección del residuo de Exonuclease: El substrato de una sola fila de la DNA del pmol 200 U de este producto y 50 fue incubado en 37°C para 16 h, y la banda de la electroforesis de la DNA no cambió después de electroforesis de la PÁGINA de la desnaturalización.

Detección de residuo del endonuclease: 200 U de este producto y de 0,3 μg de la DNA pBR322 fueron incubados en 37°C para 4 h, y las bandas de la electroforesis de los plásmidos no fueron cambiadas por electroforesis del gel de la agarosa.

Detección del residuo de la ARNasa: el producto de 200 U y 1 μg de ARN de 293 células fueron incubados en 37°C para el minuto 30, y la banda de la electroforesis del ARN era sin cambios por electroforesis del gel de la agarosa.

Detección del residuo de la DNA de E.coli: el residuo ácido nucléico en 60 U fue detectado por el qPCR gDNA-específico de Escherichia Coli TaqMan, y el residuo de genoma de Escherichia Coli era menos de 10 copias.

Detección funcional 1: la enzima de 200 U fue añadida al sistema reverso de la transcripción, 1 ARN total de las células HeLa del μg fue utilizado como plantilla, (despegue) ₂₃ oligos como cartilla, y la reacción fue conducida en 50°C para el producto del cDNA 45 min.1/10 fue tomada para la amplificación de la polimerización en cadena del gen de VIN. La electroforesis del gel de la agarosa con la coloración del EB mostró una sola banda de 4,6 kb.

Detección funcional 2: la enzima de 200 U fue añadida al sistema reverso de la transcripción, 1 ARN total de la célula HeLa de la página fue utilizado como plantilla, (despegue) ₂₃ oligos como cartilla, y la reacción fue conducida en 50°C para el producto del cDNA 30 min.1/10 fue tomada para la amplificación de la polimerización en cadena del gen de GAPDH. La electroforesis del gel de la agarosa con la coloración del EB mostró una sola banda de 550 puntos de ebullición.

Detección funcional 3: las células HeLa de 500 ng suman el ARN como plantilla, (despegue) ₂₃ oligos VN como cartilla, reacción 50°C para el producto del cDNA 45 min.1/10 fueron tomadas para la amplificación de la polimerización en cadena del gen de Polε. La electroforesis del gel de la agarosa, EB que mancha, una sola banda (cromatografía-rica) de 7,1 kb puede ser considerada.

Materias que necesitan la atención

Prevenga la contaminación de la ARNasa

Por favor mantenga el área experimental limpia. Los guantes y las máscaras limpios se deben llevar durante la operación. ARNasa-libre será asegurado para los tubos centrífugos, midiendo con una pipeta las extremidades y otros materiales consumibles usados en el experimento.

Selección de las cartillas

Siga el experimento es polimerización en cadena

Si la plantilla está de origen eucariótico, despegue oligo se prefiere generalmente, emparejado con el 3' polivinílico una cola del mRNA eucariótico para la producción máxima de cDNA integral.

Las cartillas específicas del gen (GSP) tienen la especificidad más alta. Sin embargo, en algunos casos, el GSP utilizó para la reacción de la polimerización en cadena no puede dirigir con eficacia la síntesis del primer filamento de cDNA. a este punto, la transcripción reversa se puede hacer de nuevo usando despegue oligo o hexamers al azar.

Los hexamers al azar tienen la especificidad más baja, y todo el ARN, incluyendo el mRNA, rRNA, y el tRNA, se podría utilizar como plantillas para los hexamers al azar. Los hexamers al azar se pueden utilizar como cartilla cuando la región de la blanco tiene una estructura secundaria compleja o un alto contenido de la CROMATOGRAFÍA GASEOSA, o cuando la plantilla es procariótica y el uso de despegue oligo o de las cartillas gen-específicas (GSP) no puede dirigir con eficacia síntesis del cDNA.

Siga el experimento es qPCR

Despegue oligo se mezcló con hexamers al azar dio lugar a la misma eficacia de la síntesis del cDNA en cada región del mRNA, ayudando a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.

Dongsheng Biotech ofrece diversa serie de productos para ayudarle a alcanzar éxito de la polimerización en cadena. Para las enzimas, nuestra polimerasa de Taq, la polimerasa de DNA del HS Taq, la polimerasa de DNA de la polimerasa, de Pfu de DNA del FS Taq y la polimerasa de DNA de Pfu de la fusión proporcionan de alta fidelidad, eficiente, funcionamiento de la polimerización en cadena de la sensibilidad. También tenemos polimerasa de DNA larga de Taq para el funcionamiento largo de la polimerización en cadena.